Микробиологическая диагностика позволяет поставить или подтвердить клинический диагноз инфекционного заболевания, определить источник инфекции и чувствительность возбудителя к антибактериальным препаратам.
В микробиологической лаборатории используют различные методы диагностики:
— микроскопический;
— культуральный;
— биологический;
— серологический;
— аллергологический;
— молекулярно-генетический. Микроскопический метод— обнаружение
микроорганизмов в препаратах из исследуемого материала и их первичная морфологическая идентификация. Микропрепараты могут быть нативными (изучаются микроорганизмы в живом состоянии), при этом можно определить подвижность исследуемых объектов. Изучение таких препаратов осуществляется в затемненном поле зрения светового микроскопа, а также с помощью темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.
Исследование фиксированных и окрашенных различными методами препаратов дает
возможность определить расположение микроорганизмов в препарате, их размеры, компоненты клетки, отношение к окраске. Микроскопическая техника может быть различной: световой, люминесцентный, электронный микроскопы и др.
Световая микроскопия из-за ничтожно малых размеров вирусов при исследовании вируссодержащего материала практически не применяется. С помощью светового микроскопа можно выявить внутриклеточные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых вирусных инфекциях. В этом случае чаще всего используют электронный микроскоп, реже — люминесцентный. Световой микроскоп можно применять лишь для обнаружения крупных вирусов, используя методы сверхокраски.
Микроскопический метод чаще используют как ориентировочный, так как микроорганизм не всегда можно идентифицировать по морфологическим признакам.
Культуральный метод— посев исследуемого материала на питательные среды, куриные эмбрионы, культуры клеток для выделения чистой культуры возбудителя и его идентификации. Этот метод является «золотым стандартом» микробиологического исследования, потому что позволяет успешно выделить и идентифицировать возбудителя, хотя и является дорогостоящим, трудоемким и длительным (проводится в течение 3-5 дней, а иногда и более). Данный метод проводят в следующих вариантах. — Бактериологический метод— выращивание бактериальной культуры, которую идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и антигенным свойствам. При необходимости этот метод позволяет провести эпидемиологическое маркирование и определить чувствительность к антибиотикам. Иногда перед посевом проводят первичную микроскопию исследуемого материала (это необязательный этап). Моча, кровь, фекалии, мазки из зева и носа первичной микроскопии не подлежат. Гной, спинномозговая жидкость, мокрота (в разведении 10 4-10 5) подлежат микроскопии перед посевом, так как микроскопия помогает выбрать среды для посева. Выделение чистой культуры проводят в несколько этапов:
■ 1-й этап— посев исследуемого материала методом, позволяющим получить рост отдельных колоний;
■ 2-й этап— проверка роста колоний на питательной среде и изучение их культуральных свойств (величины, цвета, формы колоний, их прозрачности, характера поверхности, однородности структуры). Изучение культуральных свойств заканчивается приготовлением мазка из колонии и окра-
ской его по Граму, определяя при этом морфологические и тинкториальные свойства бактерии. После этого проводят пересев на скошенный агар или чашку Петри для накопления чистой культуры;
3-й этап— проверка чистоты накопленной культуры (готовят мазок, окрашивают его по Граму и микроскопируют). Если накопленная культура чистая, ее идентифицируют по биохимическим свойствам и антигенной структуре. Для биохимической дифференциации используют дифференциально-диагностические среды, содержащие различные субстраты. Сахаролитические свойства изучают на средах Гиса, которые изменяют свою окраску в случае ферментации сахара бактерией и выделения при этом кислоты, которая изменяет окраску индикатора. О способности расщепления белков судят по разжижению желатины; продуктами распада белков также являются индол, сероводород и аммиак, выделения которых фиксируют с помощью изменения окраски индикаторных бумажек, например, пропитанной индолом, щавелевоуксусной кислотой, сероводород — уксуснокислым свинцом, аммиак — лакмусовой бумажкой;
■ 4-й этап— оценка результатов биохимических исследований и определение таксономического положения микроорганизма, что является основой антигенной идентификации.
— Микологический методиспользуют при культивировании грибов; посев исследуемого материала проводят на специальную среду Сабуро.
— Протозоологический метод(паразитологический) применяют при выделении простейших.
— Вирусологический методиспользуют при работе с вируссодержащим материалом. Метод заключается в выделении вирусов при заражении исследуемым материалом лабораторных животных, куриных эмбрионов, культур клеток с последующими индикацией вируса в зараженном объекте и его идентификацией.
Биологический метод(экспериментальный, биопроба) — выделение чистой культуры при заражении экспериментальных животных с последующими высевом крови, секционного материала на питательные среды, выделением чистой культуры и ее идентификацией. Этот метод позволяет определить факторы патогенности микроорганизма, летальную дозу, тип токсина, вырабатываемого микроорганизмом.
Серологический методоснован на выявлении АТ в сыворотке крови (а также в слюне и других биологических жидкостях больного) с помощью известных бактериальных АГ. Этот метод позволяет определить количество (титр) АТ и течение инфекционного
процесса по нарастанию титра АТ, а также стадию заболевания. Для этого определяют класс Ig. Обнаружение специфических Ig класса М свидетельствует об острой инфекции. При диагностике некоторых инфекций (гепатита В) определяют АГ микроорганизмов в материале от больного.
Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в острый период, в начале болезни, и хранят при температуре 4-8 °C, а вторую сыворотку — через 10-14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра АТ во второй сыворотке по отношению к первой. Диагностической является сероконверсия в 4 раза и выше. В связи с тем что многие вирусные болезни протекают остро, этот вариант серологического метода обычно применяют для ретроспективной диагностики.
Аллергологический методоснован на выявлении повышенной чувствительности к бактериальному аллергену. С этой целью проводят кожно-аллергические пробы с диагностическими аллергенами.
Молекулярно-генетический методоснован на идентификации возбудителя в исследуемом материале путем определения нуклеотидных последовательностей с помощью ПЦР, молекулярной гибридизации, микрочипа и других методов молекулярной биологии.
— Полимеразная цепная рекцияпозволяет обнаружить микроорганизм в исследуемом материале (воде, продуктах, материале от больного) по наличию в нем ДНК микроорганизма без выделения последнего в чистую культуру. Для проведения ПЦР из исследуемого материала выделяют ДНК, а наличие возбудителя определяют по обнаружению в выделенной ДНК специфичного для искомого микроорганизма гена. Обнаружение гена осуществляют его накоплением. Для этого требуются праймеры (затравки), комплиментарные ДНК искомого гена. Накопление (амплификацию) гена выполняют следующим образом. Выделенную из исследуемого материала ДНК нагревают. При этом ДНК распадается на две нити. Добавляют праймеры, смесь ДНК и праймеров охлаждают. При этом праймеры при наличии в смеси ДНК искомого гена связываются с его комплиментарными участками. Затем к смеси ДНК и праймера добавляют ДНК-полимеразу и нуклеотиды. Устанавливают температуру, оптимальную для функционирования ДНКполимеразы. В этих условиях в случае комплементарности ДНК гена и праймера происходит присоединение нуклеотидов к З’-концам праймеров, в результате чего синтезируются две копии гена. После этого цикл повторяется снова, при этом
количество ДНК гена будет увеличиваться каждый раз вдвое (рис. 9.1). Реакцию проводят в специальных приборах — амплификаторах. Результат оценивается последующими денситометрией амплифицированной ДНК или ее электрофорезом в полиакриламидном геле. ПЦР применяют для диагностики вирусных и бактериальных инфекций.
Рис. 9.1.Полимеразная цепная реакция (схема)
— Молекулярная гибридизацияпозволяет выявить степень сходства различных ДНК. Применяют при идентификации микроорганизмов для определения их точного таксономического положения, а также для их обнаружения в исследуемом материале без выделения в чистую культуру. Метод основан на способности двухцепочечной ДНК при повышенной температуре (90 °C) в щелочной среде денатурировать, т.е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °C вновь восстанавливать исходную двухцепочечную структуру. Метод требует наличия молекулярного зонда — одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, меченной радиоактивными нуклидами, ферментом, флюорохромным красителем, с которой сравнивают исследуемую ДНК. Для проведения молекулярной гибридизации исследуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить закрепляют на специальном фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий зонд. Создают условия, благоприятные для образования двойных спиралей. При комплиментарности между зондом и исследуемой ДНК они образуют между собой двойную спираль, наличие которой определяют следующими методами в зависимости от типа метки зонда: подсчетом радиоактивности, иммуноферментным анализом или денситометрией.
— Определение микроорганизма в исследуемом материале с помощью микрочипа.Микрочип представляет собой стеклянную пластинку, к которой прикреплены молекулярные ДНКзонды, специфичные к определенным микроорганизмам. Из исследуемого образца выделяют общую ДНК, связывают ее с флюорохромом или ферментом и обрабатывают ею микрочип, создавая условия для гибридизации. Затем отмывают не связавшуюся ДНК и определяют локализацию молекулярных гибридов постановкой ИФА или денситометрией.
Дата публикования: 2015-11-01; Прочитано: 384 | Нарушение авторского права страницы
studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2018 год.(0.002 с)…
Биологический метод заключается в выделении чистой культуры возбудителя путем заражения лабораторных животных исследуемым материалом от больного и последующим бактериологическим исследованием трупа животного.
Биологический метод проводится с использованием чувствительных лабораторных животных. Для экспериментального заражения чаще используют белых мышей, крыс, морских свинок и кроликов. Для некоторых специальных исследований служат обезьяны, кошки, собаки, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, дикие животные (хомяки, суслики, дикие крысы, полевки), птицы (куры, голуби и т. д.), а также куриные эмбрионы. При выборе вида лабораторного животного необходимо учитывать степень его восприимчивости к изучаемому возбудителю инфекции. Для получения сравнимых результатов исследования проводят на животных одного вида, пола и массы.
Лабораторные животные используются не только с целью выделения и накопления чистой культуры, но и для изучения клинической картины заболевания и для учета реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.
Существуют следующие способы заражения: подкожный, внутрикожный, накожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), интраназальный (через нос в дыхательный тракт), введение в глаз, введение в центральную нервную систему. При внутрикожном или накожном способе заражения шерсть на месте введения или нанесения материала удаляют выстриганием, выщипыванием или депилированием.
Вскрытие следует производить непосредственно после гибели животного, чтобы избежать проникновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, протоколируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, применяемый для заражения, время гибели, обнаруженные изменения и т. д. Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы жидкость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают. Отмечают цвет, величину и консистенцию каждого органа. Из измененных органов (или из всех, в зависимости от цели эксперимента) делают высев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. Для посева прижженную поверхность органа надрезают стерильным скальпелем, из глубины органа вырезают маленький кусочек, часть его помещают в питательную среду, а из другой делают мазки-отпечатки, прикладывая срезанную часть к стеклу. Обязательно делают посев крови из сердца. Для этого прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Кровь из капилляра выдувают в жидкие питательные среды и делают из нее мазки. После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного сжигают или автоклавируют. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирующим раствором. Мазки фиксируют в пламени или жидким фиксатором, окрашивают и изучают.
Биопроба — метод контроля биологических препаратов (вакцин, сывороток), основанный на их введении лабораторным животным с целью оценки токсичности, пирогенности и иммунологической активности.
III. План практической работы
1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности
а) капсулы бактерий в готовых мазках
Для обнаружения капсул используют метод Бурри-Гинса: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются фуксином в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне в виде прозрачных, белых ореолов вокруг красных бактерий.
б) жгутиков бактерий — зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).
По количеству и расположению жгутиков различают монотрихи — один жгутик, перитрихи — жгутики по всей поверхности бактериальной клетки, лофотрихи — пучок жгутиков на одном конце клетки, амфитрихи — единичные жгутики или пучки жгутиков на разных полюсах клетки.
в) корд-фактора у патогенных микобактерий
При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос — тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).
2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.
Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 18-24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (α) гемолиза.
Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.
Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).
3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.
Полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой, накладывают на поверхность прозрачного сывороточного агара в чашке Петри. Культуры дифтерийной палочки сеют бляшками на расстоянии 0,6-0,8 см от полоски фильтровальной бумаги и 1-1,5 см друг от друга. Исследуемые и контрольную (токсигенную) культуры дифтерийной палочки чередуют с одной стороны полоски фильтровальной бумаги, а напротив, с другой стороны полоски сеют одноименные культуры (дубли). Чашку инкубируют при 37◦С в течение 24-48 часов. Затем проводят учет. Положительной реакция считается при наличии тонкой линии преципитата между полоской фильтровальной бумаги и ростом бактерий в виде бляшки, отрицательной — при её отсутствии. Реакция считается специфичной, если контрольная (токсигенная) культура дала положительный результат.
4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.
5. Заполнить таблицы по теме занятия
6. Решить ситуационные задачи
УИРС.Учесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.
IV. Примеры ситуационных задач
Ситуационная задача № 1
Больной А, 18 лет, поступил в инфекционное отделение с карбункулом затылочной области. При проведении бактериологического исследования выделена чистая культура этиологического агента инфекционного заболевания. При изучении факторов патогенности выделенной чистой культуры выявлена зона опалесценции на желточном агаре и зона полного просветления на кровяном МПА. Дайте характеристику данного микроорганизма.
- лецитиназа положительный
- лецитиназа отрицательный
- плазмокоагулаза положительный
- уреаза положительный
- гемолитический (β-гемолиз)
В инфекционное отделение детской областной больницы поступил ребенок 6 лет с подозрением на дифтерию. В ходе бактериологического исследования выделена чистая культура дифтерийной палочки (Corynebacterium diphtheriae). При проведении реакции преципитации в агаровом геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой определяется зона преципитации.
Содержание
1.1 Принципы диагностики инфекционных заболеваний
Сформулируйте заключение:
- исследуемая культура дифтерийной палочки лецитиназа положительна
- исследуемая культура дифтерийной палочки токсигенна
- исследуемая культура дифтерийной палочки коагулаза положительна
- исследуемая культура дифтерийной палочки не токсигенна
Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
1. Антибиотики и антимикробная терапия
2. Основные группы химиопрепаратов и антибиотиков
3. Механизмы действия антибактериальных препаратов на микроорганизмы
4. Побочное действие антибиотиков
5. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов
6. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
7. Учение об инфекции. Понятия «инфекция» и «инфекционное заболевание»
8. Формы симбиоза
9. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций
10. Периоды и исходы инфекционного заболевания
11. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности
12. Основные факторы патогенности микроорганизмов
13. Микробные токсины
14. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
Микроскопические методы исследования основаны на обнаружении и исследовании возбудителя в биологическом материале. Используют светооптическую и электронную микроскопию.
Профилактика инфекционных заболеваний
Светооптическая микроскопия позволяет изучать объекты размером более 0,2 мкм (бактерии, простейшие, грибы и др.), электронная микроскопия — более мелкие объекты (вирусы, отдельные структуры микроорганизмов).
Микроскопический метод широко применяют в диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, паразитарных и (реже) вирусных заболеваний.
В повседневной практике бактериологической лаборатории микроскопическое исследование, как правило, используют для ускоренной ориентировочной диагностики. Основные задачи микроскопии: выявление возбудителя в клиническом материале, ориентировочная идентификация на основе определения характерных морфологических и тинкториальных признаков микроорганизмов, а также изучение окрашенных мазков из колоний чистых культур. При некоторых инфекционных болезнях, для возбудителей которых характерна специфичность морфологии (про-тозойные болезни, гельминтозы, грибковые заболевания, спирохетозы), микроскопическое исследование — основной или один из основных методов диагностики.
Материалом для микроскопического исследования могут служить кровь, костный мозг, СМЖ, пунктаты лимфатических узлов, фекалии, дуоденальное содержимое и жёлчь, моча, мокрота, отделяемое мочеполовых путей, биоптаты тканей, мазки со слизистых оболочек (ротовой полости, нёбных миндалин, носа, влагалища и др.).
Для обнаружения кровяных паразитов, например простейших (малярийные плазмодии, трипаносомы, лейшмании, бабезии) и гельминтов (микрофилярии), исследуют препараты крови «тонкий мазок» и/или «толстая капля».
Автор: Светлана Васильевна
Методы диагностики вирусных заболеваний
Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:
1. Вирусоскопический.
2. Иммунной электронной микроскопии.
3. Вирусологический.
4. Серологический.
5. Иммунофлуоресцентный.
6. Биологический.
7. Использование ДНК-(РНК)-зондов.
8. Цепная полимеразная реакция.
При вирусоскопическом методе в исследуемом материале обнаруживают с помощью электронной микроскопии вирионы или с помощью светооптической микроскопии внутриклеточные включения. Метод электронной микроскопии дает возможность обнаружить вирионы, но он недостаточно специфичен.
Гораздо более специфичным, чувствительным и надежным является метод иммунной электронной микроскопии. Он оказался особенно полезным для обнаружения тех вирусов, которые не размножаются в культуре клеток и для которых нет других тест-систем. В основе этого метода лежит взаимодействие антител с вирусами при смешивании вирусосодержащего материала со специфической сывороткой.
В результате взаимодействия антител с вирусами образуются микропреципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых своеобразным «венчиком». Специфичность агрегации вирионов антителами позволяет надежно их идентифицировать. Разрешающая способность метода возрастает благодаря тому, что образование иммунных агрегатов повышает концентрацию вирионов в микропрепарате.
Сам процесс иммунной электронной микроскопии включает следующие процедуры:
1) приготовление водного экстракта исследуемого материала и смешивание его с соответствующим объемом специфической сыворотки;
2) осаждение образующихся микропреципитатов центрифугированием;
3) негативное контрастирование иммунного преципитата фосфорно-вольфрамовой кислотой;
4) нанесение материала на сеточку;
5) просмотр препарата в электронном микроскопе.
Единственный недостаток этого метода заключается в его громоздкости, поэтому он не может быть использован для массовых исследований.
Вирусологический метод основан на выделении вирусов и их идентификации с использованием культур клеток или куриных эмбрионов. Для проведения вирусологического исследования важное значение имеют: выбор материала и его предварительная обработка, условия транспортировки и соблюдение необходимых условий для культивирования вируса. Материал для исследования определяется характером вирусного заболевания, местом размножения вируса в организме и путями его выделения.
Для подавления возможного роста бактерий исследуемый материал обрабатывают антибиотиками, или последние (в определенных концентрациях) добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток. Выбор способа культивирования (заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур клеток) определяется биологией предполагаемого возбудителя.
Важное значение имеет соблюдение стандартных условий культивирования: оптимальная температура, продолжительность, использование дополнительных тестов для индикации (бляшкообразование, реакции гемадсорбции, гемагглютинации, иммунофлуоресценции и т. д.). Для идентификации вирусов применяются типоспецифические сыворотки.
Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследуемом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов.
Для этих целей могут быть использованы все известные серологические реакции:
1. Реакция связывания комплемента.
2. Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты (РНАг, РНАт).
3. Реакция торможения гемагглютинации.
4. Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах).
5. Реакции преципитации в геле.
6. Реакции нейтрализации вирусов.
7. Радиоиммунный метод.
микробиологические методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний Микроскопический
Методы иммуноферментного анализа.
Из перечисленных методов все большей популярностью пользуются методы иммуноферментного анализа, отличающиеся высокой специфичностью и удобством использования.
Иммунофлуоресцентный метод, применяемый в прямом и обратном вариантах, является методом ускоренной диагностики.
Биологический метод основан на использовании животных, чувствительных к соответствующему вирусу.
Метод гибридизации ДНК-ДНК, или метод ДНК-зондов — один из наиболее перспективных способов исследования в современной биологии и медицине. Он может быть использован для выявления любых генов, любых фрагментов нуклеиновых кислот.
В его основе лежит способность однонитевых молекул нуклеиновых кислот вступать во взаимодействие с комплементарными нитями и образовывать двунитевые гибридные молекулы. Гибридизация осуществляется или в растворах, или, чаще всего, на твердых подложках, таких, например, как нитроцеллюлозная мембрана. Исследуемую клеточную суспензию лизируют для высвобождения нуклеиновых кислот.
После этого двухцепочечную ДНК предварительно денатурируют, а образующиеся одноцепочечные молекулы переносят на мембрану, где они ковалентно связываются с ДНК-зондом, который представляет собой меченные изотопом или ферментом денатурированные молекулы нуклеиновой кислоты. Гибридизация происходит лишь в том случае, если между зондом и иммобилизованной на мембране нитью ДНК имеется гомология.
Несомненно пластиковые окна совершили большую революцию на рынке стройматериалов на рубеже веков. На смену старым деревянным окнам, из которых вечно дует ветер, приходят экологичные и удобные окна от fabrikaokon.by, не пропускающие как холод, так и шум с улицы.
Не нашли подходящую информацию? Не беда! Воспользуйтесь поиском на сайте в верхнем правом углу.