Микробиологические исследования почвы

Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Плодородие зависит от химического состава, физических свойств и водного режима почвы. Почва — среда обитания не только для растений, но и большой группы микроорганизмов, беспозвоночных и даже хордовых животных. Проблемы рационального использования почв, во многих отношениях являются ключевыми в современных условиях жизни — будь то вопросы строительства, добыча полезных ископаемых, организация зон отдыха или других видов человеческой деятельности.

Состояние почв оказывает воздействие на здоровье населения через продукты питания или загрязнения вод и воздуха. Также возможно и прямое воздействие загрязненных почв на здоровье населения — особенно детей — за счет непосредственного контакта и поступления почвы в организм. Именно поэтому оценке качества почв и грунтов урбанизированных территорий придается все большее значение, на ее основе принимаются решения о возможности размещения тех или иных промышленных или культурно-массовых объектов, изменяется стоимость земельных лотов и размещенных на них объектов.

Санитарная охрана почвы как одного из важнейших объектов окружающей среды в настоящее время имеет актуальное значение. Несмотря на проводимые профилактические мероприятия, заболеваемость кишечными инфекциями бактериальной и вирусной природы остается на высоком уровне, что в значительной степени обусловлено циркуляцией в окружающей среде, в том числе и почве, патогенных энтеробактерий и кишечных вирусов.

Общее микробное число определяют глубинным посевом (на плотной среде) Перфрингенс-титр почвы — минимальное количество почвы, в котором еще определяются Clostridium perfringens. При фекальном загрязнении почвы клостридии обнаруживают в титре 0,01 г. Определяют перфрингенс-титр глубинным посевом.

Оценка фекального заражения проводится по индексу БГКП – коли-титр(количество БГКП в 1 г почвы).

На свежее фекальное загрязнение указывают: обнаружение энтерококков, большое количество БГКП при отсутствии нитрифицирующих бактерий, относительно высокое содержание вегетативных форм клостридий.

Титр БГКП и перфрингенс-титр для сильно загрязненных почв – 0,009; для чистых почв – коли-титр 1,0; перфрингенс-титр – 0,01.

Почва как фактор передачи инфекционных болезней

Почва является местом обитания спорообразующих палочек родов Bacillus и Clostridium. Патогенные спорообразующие палочки (возбудители сибирской язвы, ботулизма, столбняка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum).

Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии — могут попадать в почву с фекалиями. Обнаружение их в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных.

Метод отбора

Пробы отбирают стерильной железной лопаткой, совком или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером отобранной пробы почвы.

Масса каждого образца должна быть 200—300 г, а смешанного — не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее чем через 12—18 ч при условии их хранения при 1—5°С.

При подготовке пробы почвы для анализа образцы почвы освобождают от крупных включений (щебень, корни, стекла), размельчают, просеивают через сито, высыпают на стерильную бумагу, тщательно перемешивают и отвешивают 30 г. В колбу вместимостью 500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят отвешенный образец почвы. Колбу встряхивают в течение 10 мин и из полученной суспензии (1 : 10) без отстаивания с учетом предполагаемого загрязнения почвы готовят последующие разведения: для чистых почв до 4 разведения (1 : 10000), для загрязненных — до 6 разведений, (1:1000000).

Приготовленные разведения используют для проведения краткого или полного микробиологического анализа почвы.

Краткий микробиологический анализ почвы. Он включает определение микробного числа и бактерий группы кишечных палочек (коли-титр).

Методика определения микробного числа почвы аналогична той, которую применяют при исследовании воды.

Определение коли-титра почвы проводят методом бродильных проб с использованием среды Кесслер или среды с ТТХ (трифенил-тетразолхлорид), а также методом мембранных фильтров.

Метод бродильных проб с использованием среды Кесслер. Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых почв 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000; для загрязненных — от 1 : 1000 до 1 : 1000000. После тщательного перемешивания 1 мл почвенной суспензии из разведения 1 : 10 переносят в пробирку с 9 мл среды Кесслер. Для каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку. Посевы культивируют при 43°С в течение 48 ч.

На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслер. Из пробирок с наличием газа производят высев штрихом на среду Эндо. Посевы на среде Эндо культивируют при ЗТС в течение 24 ч.



МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ (БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ И ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ) АНАЛИЗ ПОЧВЫ (ГРУНТА)

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

Санитарную оценку почвы проводят по следующим показателям:

— определение ОМЧ в 1 г почвы;

— установление титра кишечной палочки (коли-титра);

— определение энтерококков (титра энтерококков);

— определение титра Clostridium perfringens;

— обнаружение патогенных микроорганизмов.

Для исследования отбирают образцы почвы из нескольких мест обследуемого участка на разной глубине (из разных мест исследуемой территории не менее 10 проб). На глубине 20-30 см пробы берут стерильным совком, из более глубоких мест – с помощью специального бура. Собирают общую пробу, тщательно перемешивают и 500 г этой смеси посылают в лабораторию.

Из навески почвы в количестве 30 г делают смыв стерильной дистиллированной водой 1:10 (270 см3), тщательно взбалтывают в течение 10 минут и отстаивают. Из этого разведения почвы готовят несколько последовательных разведений — до 1: 10 000 или 1:100 000 и выше, в зависимости от предполагаемой загрязненности почвы.

Для определения общего микробного числа из двух последних разведений берут по 0,1 см3 и заливают расплавленного и охлаждённого до 45°С питательного агара. Посевы инкубируют при 37°С, затем подсчитывают количество выросших колоний и определяют ОМЧ. Для обнаружения спорообразующих микроорганизмов смыв прогревают при 80°С 20 мин. и высевают на среды с последующим выращиванием в соответствующих условиях.

Коли-титр почвы определяют бродильным методом, используя среду Кесслера.для этого из каждого разведения почвы по одному мл переносят в пробирки со средой Кесслера и поплавком. На следующий день отмечают, в каких из пробирок появилось помутнение и пузырёк газа. В сомнительных случаях проводят пересев из таких пробирок на среду Эндо и выявляют кишечные палочки. Разведение, при котором появляется в последний разх помутнение и газ, и считается коли-титром.

Для определения энтерококков из разведений почвенной суспензии стерильной пипеткой берут 10 см3 и высевают во флаконы с 50 см3 элективной жидкой среды для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.) После инкубирования (24 часа при 37°С) из среды накопления производят пересев петлей на одну из плотных элективных питательных сред, например МИС (молочно-ингибиторную среду). На этой среде энтерококки растут в виде черных выпуклых колоний с металлическим блеском или серых мелких колоний. Подтверждают принадлежность колоний к энтерококкам с помощью микроскопирования мазков и постановкой каталазного теста. Обнаружение энтерококков всегда свидетельствует о свежем фекальном загрязнении, каковы бы ни были другие показатели.

При определении титра Clostridium perfringens по 1 см3 разведений почвы (до 1:1000 000), прогретой при температуре 75°С в течение 20 мин для исключения вегетативных форм, вносят в два параллельных ряда пробирок. Затем по стенке пробирок, избегая образования пузырьков воздуха, наливают по 9-10 см3 железосульфитного агара или среды Вильсона-Блера, предварительно расплавленных на водяной бане и остуженных до 45-50°С. Для создания анаэробных условий роста пробирки быстро охлаждают, помещая в холодную воду. Посевы инкубируют при 45°С. В среде Вильсона-Блера и железосульфитном агаре клостридии растут в глубине столбика среды, образуя черные колонии. Накапливающиеся в среде газы разрывают агар. Наибольшее разведение почвенной взвеси, которое дает в питательной среде размножение Clostridium perfringens, считают титром этого микроба в почве.

Иногда проводят определение в почве количества термофильных бактерий, актиномицетов и грибов, определение токсичности почв по отношению к микроорганизмам, определение колифагов и другие исследования. Санитарно-микробиологическую оценку почвы производят по комплексу показателей.

Предыдущая34353637383940414243444546474849Следующая

Дата добавления: 2014-12-27; просмотров: 730;

ПОСМОТРЕТЬ ЕЩЕ:

Показатели санитарного состояния почвы

1. ОБЩЕЕ МИКРОБНОЕ ЧИСЛО (ОМЧ) ПОЧВЫ — общее количество микроорганизмов в 1 г почвы.

2. КОЛИ-ТИТР ПОЧВЫ, ПЕРФРИНГЕНС-ТИТР ПОЧВЫ и др. (оценивают количество санитарно-показательных микробов почвы).

КОЛИ-ТИТР ПОЧВЫ – наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка кишечной палочки – E.coli.

ПЕРФРИНГЕНС-ТИТР ПОЧВЫ — наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка возбудителя газовой гангрены — C. perfringens.

Методы определения.

1. Определение ОМЧ почвы: а) посев 10-кратных разведений почвы (1:10, 1:100 и т.д.) в чашки Петри на МПА (для бактерий) и на сусло-агар или среду Сабуро (для грибов); посев можно делать в глубину (1 мл) или на поверхность (0,1 мл) среды; б) инкубация посевов (48 час) при 24°С для грибов и при 37°С для бактерий; в) подсчет числаколоний для каждого разведения; в) расчет микробного числа почвы (с учетом навески почвы, разведения, объема посева), зная, что 1 колония – это 1 клетка.

2. Определение коли-титра почвы: а) посев 10-кратных разведений почвы на жидкую среду Кесслера (содержит желчь, лактозу, пептон, генциановый фиолетовый, который подавляет рост многих микробов, кроме кишечной палочки); б) инкубация при 37°С, 24 часа; в) пересев положительных проб (образование газа и диффузное помутнение) на среду Эндо и инкубация при 37°С, 24 часа; г) на среде Эндо E. coli образует тёмно-красные колонии с металлическим блеском; проводят микроскопическое подтверждение колоний E. coli (из подозрительной колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют; под микроскопом видны мелкие грам"-" палочки); г) расчет коли-титра (с учетом разведения и навески почвы определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка кишечной палочки).

3.Определение перфрингенс-титра почвы: а) почвенную суспензию прогревают 10-15 мин при 80°С для того, чтобы неспоровые бактерии не росли на среде; б ) посев 10-кратных разведений почвы на среду Вильсона-Блера и инкубация при 37 — 43° С, 3-18час или посев на среду Тукаева (молочная среда) и инкубация 3 – 4 часа; в) на среде Вильсона-Блера C. perfringens образует чёрные колонии и газ разрывает среду, а на среде Тукаева наблюдается створаживание молока, а газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки; наличие C. perfringens подтверждается микроскопически (готовят мазок, окрашивают по Грамму и микроскопируют, под микроскопом видны крупные грам «+» палочки) г) расчет перфрингенс-титра (с учетом разведения определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка C. perfringens).Перфрингенс-титр определяется максимальным разведением почвенной суспензии, при посеве которого образуются на среде Вильсона-Блера характерные черные колонии.

Нормативы по коли-титру и перфрингенс-титру почвы.

Оценка почвы	Коли-титр	Перфрингенс-титр
Незагрязнённая	1 г и больше	0,1 г и больше
Слабо загрязнённая	0,1-0,01	0,01-0,001
Умеренно загрязнённая	0,01-0,001	0,001-0,0001
Сильно загрязнённая	0,001 и меньше	0,0001 и меньше

Микрофлора воды.

Вода – естественная среда обитания микроорганизмов. Состав микрофлоры воды зависят от химического состава воды, температуры, содержания CO2 и O2, рН, облучения солнечными лучами, содержания питательных веществ, флорой и фауной, глубиной водоёма, выпуском сточных и промышленных вод.

В пресных водоёмах (реки, озёра) нормальными обитателями являются Micrococcus roseus и др. микрококки, Pseudomonas fluorescens, извитые формы (Sp.

Микробиологический анализ земли

rubrum). В воду поступают сапрофитные микробы почвы: p. Azotobacter, p. Nitrobacter, p. Proteus, p. Pseudomonas, p. Spirillum и др. Микробы воды участвуют в самоочищении водоемов. Они расщепляют органические вещества и делают их пригодными для усвоения другими организмами. Они являются также пищей для раков и моллюсков.

Больше всего микроорганизмов находится в придонных слоях, на дне, в прибрежной зоне (осенью и весной), т.к. на твердых частицах, в пористых материалах задерживаются питательные вещества. Чем больше органических веществ содержится в открытых водоёмах, тем у них более богатая микрофлора. В такой загрязненной органическими веществами воде можно обнаружить клостридии и другие анаэробы, увеличивается также количество аэробов (бактерий, вибрионов, спирохет). В водоёмах, богатых сероводородом, обитают фотосинтезирующие бактерии.

Таким образом, микрофлора рек и озёр определяется, в основном, степенью их биологического загрязнения, которое происходит при поступлении в водоемы сточных и промышленных вод. В большой степени она отражает микрофлору почвы около водоёма, т.к. микроорганизмы попадают в воду с частичками пыли, ливневыми, сточными, талыми водами. Микроорганизмы также попадают в водоёмы из организма рыб, гниющих растений, с отбросами и выделениями человека, животных, а также из воздуха.

В морях и океанах обитает меньшее количество микробов, чем в пресных водоемах. Это, в основном, солелюбивые (галофильные) и светящиеся микроорганизмы.

В воду могут попадать патогенные и условно-патогенные микробы из почвы, вместе со сточными и промышленными водами из населённых пунктов и плавающих судов, при стирке белья, купании лошадей, при попадании в воду трупов грызунов и других животных, погибших от инфекций.

Эти бактерии не приспособлены к существованию в воде и через некоторое время погибают. Но определенное время они сохраняются в воде: сальмонеллы – от 2 дней до 3 месяцев, шигеллы 5-9 дней, лептоспиры 7-150 дней, холерный вибрион до нескольких месяцев и даже может размножаться.

Таким образом, вода может быть фактором передачи инфекционных заболеваний (брюшного тифа и паратифа, дизентерии, сальмонеллёза, холеры, лептоспироза, полиомиелита, гепатита, туляремии). В связи с этим необходимо проводить санитарно-эпидемиологический контроль состояния воды.

Оценка санитарного состояния воды.

Дата добавления: 2016-07-29; просмотров: 222 | Нарушение авторских прав

Похожая информация:

Поиск на сайте:

Похожие главы из других работ:

Антропогенные источники загрязнения почв, пути их устранения

2.1 Анализ загрязнений почвы

После извлечения загрязняющих веществ из почвы (экстракция или термодесорбция) анализ полученного экстракта или конденсата ничем не отличается от аналогичной процедуры, принятой в газохроматографическом анализе загрязнений воздуха…

Влияние физико-географических факторов на здоровье населения Краснодарского края

1.5 Почвы

Почвы Краснодарского края весьма разнообразны. Такое своеобразие почв вызвало необходимость выделить их в особую Предкавказскую почвенную провинцию. Придерживаясь географических принципов…

Деградация почвенных ресурсов

3.1Гигиена почвы. Роль почвы в обмене веществ

Почва в городах и прочих населенных пунктах и их окрестностях уже давно отличается от природной, биологически ценной почвы, играющей важную роль в поддержании экологического равновесия.

17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Почва в городах подвержена тем же вредным воздействиям…

Изучение растительного покрова Черноморского побережья Туапсинского района

2.3 Почвы

В прибрежной полосе Чёрного моря, на древних морских террасах на высоте до 0,45 км над уровнем моря, от Туапсе до границы с Грузией, распространены желтозёмы и подзолисто-желтозёмные почвы…

Исследование лихенобиоты Зилаирского района Республики Башкортостан

I.4 Почвы

Почвенный покров территории района разнообразен. Для горно-лесной зоны характерно преобладание почв серого лесного типа, для степной (восточная и юго-восточная части района) преобладание почв черноземного типа…

Исследование форм и методов экологического управления и менеджмента водными ресурсами на промышленных предприятиях

2.1 Актуальность, цели и задачи исследования

Среди современных глобальных мировых проблем человечества экологические проблемы занимают едва ли не главное место…

Основы экологии

2. Эдафические факторы. Особенности температурного, водного и воздушного режимов почвы. Засоленные почвы, адаптация организмов к обитанию в условиях повышенной солености почв

Эдафические факторы (от греч. edaphos — земля, почва), почвенные условия, которые влияют на жизнь и распространение живых организмов. К эдафическим факторам относят водный, газовый и температурный режимы почвы, её химический состав и структуру…

Особенности природопользования и негативного влияния антропогенных факторов на экологическое состояние Лунинецкого района

1.6 Почвы

Южная часть изучаемой территории расположена в пределах Пинского агропочвенного подрайона, а северная — в пределах Ганцевичско-Лунинецко-Житковичского агропочвенного подрайона…

Оценка уровня химического загрязнения территории города Комсомольска-на-Амуре

1.5 Почвы

ПДК химических веществ в почве регламентируется ГН 2.1.7…

Приоритетные вещества — загрязнители почвы

2. Приоритетные вещества — загрязнители почвы и методы контроля загрязнений почвы

Флора и растительность Южного берега Крыма

1.3 Почвы

Приморская зона склона первой гряды Крымских гор разнообразна и сложна по комплексу почвенных и климатических условий. Прибрежная ее полоса, до высоты около 500 м над уровнем моря (используется для освоения под сельскохозяйственные культуры)…

Экологическая обстановка месторождения Дунга

4.1 Анализ технологических процессов, как источников загрязнения атмосферы, литосферы (почвы недр)

Мероприятия по охране недр и окружающей среды намечены с учетом специфики работ проводимых при пробной эксплуатации нефтяных залежей месторождения Дунга. На данном этапе проектирования важным является охрана воздушного и водного бассейна…

Экологическая обстановка Северо-Западного округа Москвы

4. Почвы

В настоящее время в Москве обостряется проблема химического загрязнения почв, которое в значительной мере подавляет их биологическую активность. Особо следует отметить загрязнённость почв тяжёлыми металлами: оловом, молибденом, вольфрамом…

Экологическая оценка современного состояния Гурзуфского парка-памятника садово-паркового искусства

1.2 Почвы

В нижней приморской части склона Гурзуфского амфитеатра распространены коричневые суглинистые почвы зоны сухих кустарников и редколесий. В их составе много щебня и мало гумуса (1.5-2%). Цвет почв разнообразен: коричневый, серый, красный, бурый…

Экология

Методы исследования и их цели

Экспериментальные методы позволяют проанализировать влияние на развитие организма отдельных факторов в искус-ственно созданных условиях и изучить разнообразие эколо-гических механизмов. Эксперимент в природе отличается от наблюдения тем…